혈청단백 전기영동 - EP/IFE

전기영동의 원리

-       용액에 전류를 통하면 용액 중의 Charged particle이 양극 또는 음극으로 이동하는 현상.

-       이동속도는 입자의 전하량과 분자량, 용매 사이의 마찰저항에 의해 결정되는데, 각 입자는 고유한 속도로 이동하기 때문에 물질의 분리가 가능하다.

 

등전점의 정의

-       용액 상에 존재하는 용질(단백질)의 총 전하량이 “0”일 때의 용액의 pH

-       아미노산의 pI의 경우, pK1, pK2, pK3를 통해 계산 가능하다.

 

전기영동 방법의 이해 2D SDS-PAGE

(Sodium Dodecyl Sulfate - Polyacrylamide Gel EP)

2D SDS-PAGE 기법

1.     pH gradient가 걸려있는 gel을 통해 단백질들의 고유한 pI 값에 따라 분리한다. 이를 IEF (Isoelectric focusing)이라 한다. 각 단백질은 중성 전하를 띄는 pH 값(pI)에 위치하게 된다.

2.     SDS-PAGE를 통해 분자량 차이에 따라 단백질을 분리한다.

-       계면활성제의 일종인 SDS를 활용해 단백질 구조를 깨뜨려 선형으로 만들어주고 아미노산 2개에 SDS 한 분자가 binding하여 단백질 본래 전하와 관계없이 (-)전하를 띄게 된다.

-       PAGE는 acrylamide의 중합반응으로 만들어진 gel로, 가교제의 농도 및 비율에 의해 gel 내 micropore의 크기를 조절할 수 있어 다양한 생체 분자들을 높은 정밀도와 분해능으로 분리할 수 있다.

 

전기영동의 구성 요소의 이해 Media, buffer, detection & staining 방법 등

1.     Media - 임상적으로 agarose gel이나 cellulose acetate을 많이 이용한다

2.     Buffer – 일정 pH 유지와 전극의 전도를 유지하는 데 중요한 역할을 한다.

 

본원 검사실 EP/IFE 기계, 염색 시약

-       우리 병원 EP/IFE 기계: Sebia(France) 사에서 만든 CAPILLARYS, HYDRASYS 각각 1대씩. CAPPILLARYS: Serum/Urine EP, IFE(Capillary method) / HYDRASYS: Serum/Urine IFE(Gel)

-       Media는 agarose gel

-       염색 시약은 Acid Violet

 

분리능이란 무엇인가? 분리를 높이기 위한 방법은? – 분리 해상도

-       전위차, 전압을 높인다.

 

전기영동을 이용한 임상검사 항목 확인

-       Serum/Urine/CSF에서 protein 분석

-       Hemoglobin subclass 정량

-       Lipoprotein 분석

-       ALP/CK/LD Isoenzyme 분석

 

TLA(Total Laboratory Automation) 

-       임상화학검사실 파트장님께 부탁드려 5/6(금) 살펴봄.

-       Roche Cobas c702로 Routine 임상화학 검사 자동화 결과 냄. 응급화학검사도 같은 기계.

-       Roche Cobas e801로 면역검사법 ECL(Electrochemiluminescence)를 통해 각종 면역 화학 검사 결과를 낸다.

        Ex) 바이러스 Ag/Ab titer, 종양표지자(AFP, PSA 등), 호르몬 검사(TSH 등)

-       Roche Cobas c702 (자동생화학분석기): 11대

-       Roche Cobas e801 (자동면역분석기): 6대

 

Ref)

-       검사정보조회(통합)

-       임상화학 검사지침서(EP/IFE)

-       Tietz Textbook of Clinical Chemistry and Molecular Diagnostics