골수 검사(5) - 면역조직화학 염색. Immunohistochemistry stain

자, 미루고 미뤄왔던 전공 공부 정리 다시 달려봅니다~~~

최근 본업, 본캐가 바쁜 이유로 올릴 자료가 없었네요...ㅎㅎ

 

오늘은 면역조직화학 염색의 원리와 종류, 그리고 각각의 염색(stain)을 통해 어떤 세포들을 확인할 수 있는지 알아보겠습니다!

 

 

1. 면역조직화학 염색의 원리

직접법 vs. 간접법

 

면역조직화학 염색이란, 항원-항체 반응을 활용한 특수 염색으로, 혈액암세포가 표지하는 특이적인 항원을 염색하는 방식으로 백혈병을 비롯한 각종 혈액종양 진단에 활용된다.

 

그 중에서도 우측 그림의 간접법은 직접법에 비해 민감도(sensitivity)가 높은 장점을 갖는다.

조직 내 항원에 표지제가 접합되지 않은 1차항체와 반응시키고,

조직을 buffer로 잘 세척하여 결합되지 않은 1차항체를 제거한 후

표지제(marker)와 결합된 2차항체를 1st Ab의 Fc 부분에 작용시켜

항원의 존재와 위치를 검출하는 방법이다.

 

표지제를 1st Ab에 결합시키는 과정에서 항체가 손실되는 것을 방지하기 위해 고안된 방법이다.

직접법에 비해 민감도가 높은 장점이 있으나, 시간이 많이 소요되고 검사과정이 복잡하다.

 

2. 면역조직화학 염색의 종류 & Target cell

•CD34: Blast

•CD61: Megakaryocyte

•MPO, CD117: Myeloid precursor(blast)

•TdT: Lymphoblast

•B,T stain: CD3(T cell), CD20(B cell), CD79a(Pre-mature B cell)

--> lymphoid aggregation이 보이면 B cell과 T cell marker에 해당하는 CD3,20,79a에 대한 면역화학 염색을 시행한다!

•Reti/MT: fibrosis

•Glycophorin A: erythroid precursor

 

3. 세포에 해당하는 IHC marker들

•Blast: CD34+38-117+

 

•Leukocyte: CD45

 

•Granulocyte: CD13,33,11b,15

 

•Monocyte: CD64,4,14,11b,16

 

•T lymphocyte: CD3,7,5,2,4,8

 

•T helper: CD3,4

 

•T reg: CD4, 25

 

•Cytotoxic T: CD3,8

 

•B lymphocyte: CD19,20,79a,22

•Megakaryocyte: CD41, 61

•NK cell : CD16, 56

 

4. PAS (Periodic Acid-Schiff) stain

1. 검사 원리

백혈구의 세포질 내에는 polysaccharide, mucopolysaccharides, mucoprotein, glycoprotein  등이 존재한다.

이들의 α-glycol기가 periodic acid(과요오드산)에 의해 산화되어 aldehyde를 생성하고, 이것이 Schiff reagent와 반응하여

fuchsin을 방출하면서 붉은 자주색으로 염색된다.

말초혈액 및 골수 세포에서 PAS 양성의 주된 이유는 glycogen 때문이다.

2. 임상적 의의

- Polymorphonuclear leukocyte, monocyte, platelet 

- ALL : block dot 
           L3 generally negative

- AML : M1, 2 generally negative
            M4, 5 sometimes positive
            M6 positive in erythroid cells
            M7 positive in megakaryoblasts

 

5. Peroxidase stain

1. 검사원리

백혈구의 Peroxidase는 hydrogen peroxide에 대해 여러가지 기질들의 산화 반응에 촉매역할을 하는 효소로 효소활성도에 따라 greenish brown color의 염색물질을 형성한다.

2. 임상적 의의

- AML과 ALL의 감별 : AML (M1~M6) 양성,  ALL 음성

- Auer rod 양성

- M0 (AML with minimal differentiation) 음성

- M7 (Acute megakaryocytic leukemia) 음성

 

6. Non-specific Esterase stain - ANAE, ANBE

1. 검사원리

Esterase는 지방족 및 방향족 ester 등을 가수분해하는 효소로서, a-naphthyl acetate(ANAE)나 butyrate(ANBE) 기질을 이용하는 nonspecific esterase는 단구계 세포의 동정법으로 급성골수 단구성 백혈병(FAB분류 M4) 구별에 반드시 실시되는 염색법이다.

백혈구의 esterase는 naphthalene derivative 합성물을 가수분해하고, 이 때 생성된 naphthol compound가 diazonium salt와 결합하여 enzyme activity가 있는 부위나 혹은 그 주위에 불용성의 Azo 색소를 만든다.

2. 임상적의의

- 단구계 세포의 동정법으로 급성 골수단구성 백혈병(M4) 및 급성 단구성 백혈병(M5) 의 진단에 이용된다.
- ANAE 양성 : monocytes, macrophages, megakaryocytes, platelets
- ANBE 양성 : monocytes, macrophages